анализ кала

Методы исследования кала на хеликобактер пилори

Бактерия Helicobacter pylori (хеликобактер пилори) обитает в клетках слизистой оболочки желудка и двенадцатипёрстной кишки человека. Некоторые штаммы (генетические типы) микроорганизма выделяют специфические токсины, разрушающие клетки и повышающие риск возникновения таких патологий, как хронические гастриты и дуодениты, язвенная болезнь желудка и двенадцатипёрстной кишки, некоторые виды злокачественных опухолейа. Такие штаммы необходимо своевременно выявлять и лечить. Одним из способов определения инфицирования Helicobacter pylori является анализ кала.

Содержание

Механизм определения хеликобактера с помощью анализа кала

ПЦР (полимеразная цепная реакция), культуральный и иммунологические анализы кала относятся к прямым методам исследования. В отличие от косвенных методов, когда о наличии патологического агента судят по присутствию продуктов его жизнедеятельности или реакции иммунной системы организма (выработка антител), прямые методы обнаруживают непосредственно сам микроорганизм или его ДНК.
Все виды анализа кала на хеликобактериоз являются неинвазивными (нетравматичными) видами исследования в отличие от забора крови или гастродуоденоскопии.

Молекулярная диагностика

Амплификатор
Для проведения ПЦР используют специальный прибор — амплификатор

ПЦР-метод является одним из видов молекулярно-генетической диагностики и позволяет определить наличие Helicobacter pylori даже в случае присутствия в материале небольшого фрагмента ДНК бактерии.

Суть метода состоит в многократном умножении анализируемого образца возбудителя заболевания. Для проведения реакции необходим своего рода «каркас», состоящий из двух праймеров – полученных с помощью искусственного синтеза фрагментов ДНК, идентичных нуклеиновой кислоте Helicobacter pylori. Во время реакции между праймерами наращивается цепочка ДНК в случае присутствия в кале фрагмента биоматериала микроорганизма. В случае его отсутствия реакции не происходит.

Реакция проводится при определённых значениях температуры и кислотности среды, состоит из нескольких десятков повторяющихся циклов, для катализа (ускорения реакции) применяется специальный фермент – полимераза. За 30 циклов фрагмент ДНК патологического агента, присутствующий в биоматериале, умножается в миллиард раз, что позволяет с точностью диагностировать инфекцию.

При наличии соответствующих праймеров можно выявить инфицирование цитотоксичными (повреждающими клетки слизистой желудка) видами Helicobacter pylori.

Культуральный анализ

Культуральный анализ (бактериологический посев) является микробиологическим методом исследования.

Биологический материал помещается в специфическую среду, благоприятную для роста бактериальной колонии. По истечении определённого срока (для Helicobacter pylori – более недели) культуру изучают под микроскопом, используя для верной идентификации колонии различные методы – окраску, способность вступать в те или иные биохимические реакции.

Кроме выявления патологического антигена (возбудителя заболевания) метод позволяет провести тест на его чувствительность к антибактериальным препаратам, что сокращает сроки и затраты на лечение, повышает эффективность терапии.

К сожалению, в некоторых случаях результаты теста на чувствительность in vitro («в пробирке») могут не совпадать с результатами лечения in vivo (живого организма): в жизни антибиотики, подобранные лабораторным методом, могут быть не столь эффективны.

Иммунологические методы анализа

Иммунологические методы основаны на свойстве антител слипаться с антигеном. Для исследования антитела со специальными метками соединяются с анализируемым образцом, в результате, при наличии в материале Helicobacter pylori, образуются комплексы антиген-антитело.

Показания к проведению обследования

Все виды диагностики инфицирования Helicobacter pylori имеют свои преимущества и недостатки. Целесообразность применения того или иного метода зависит от разных факторов и этапов лечения. Оптимальный способ исследования выбирает врач-гастроэнтэролог.

Показания к ПЦР-анализу кала:

  • язвы, эрозии желудка и двенадцатипёрстной кишки;
  • атрофия слизистой оболочки желудка;
  • полипы, опухоли желудка;
  • гастроэзофагеальный рефлюкс (заброс содержимого желудка в пищевод), язва пищевода;
  • генетическая предрасположенность: злокачественные опухоли желудка у ближайших родственников (родителей, родных братьев и сестёр);
  • контроль эффективности антибиотикотерапии.

Исследование ПЦР-методом оптимально назначать для оценки целесообразности проведения специфического лечения антибактериальными препаратами при имеющихся органических повреждениях.

Показание к культуральному анализу – определение чувствительности к лекарственным препаратам при неэффективности эмпирического лечения. Поскольку анализ является сложным (посев требует специальной среды и отсутствия доступа кислорода) и долгосрочным, это исследование не назначается для диагностики инфекции.

Бактериологический посев способен выделять только спиралевидные формы Helicobacter pylori, но не кокковые, получившие в последнее время широкую распространённость. Этот факт дополнительно снижает ценность исследования.

Показания к иммунологическим методам:

  • симптомы функциональных и органических патологий желудка и кишечника:
    • метеоризм, изжога, отрыжка;
    • боли, имеющие периодичность в течение суток с обострениями весной и осенью;
    • поносы или запоры;
    • ощущение дискомфорта, переполнения желудка;
  • перед назначением длительной терапии нестероидными противовоспалительными препаратами или ингибиторами протонной помпы (средствами для снижения выработки соляной кислоты);
  • железодефицитная анемия или тромбоцитопения невыясненной этиологии;
  • генетическая предрасположенность;
  • инфицирование ближайшего окружения;
  • контроль эффективности антибиотикотерапии.

Иммунологические методы и ПЦР без генотипирования назначаются с целью скрининга – ввиду простоты и относительно низкой стоимости исследование проводится широким массам населения для выявления группы риска развития органических и опухолевых поражений желудка и кишечника.

К сожалению, в России скрининг на Helicobacter pylori не получил широкого распространения.

Иммунологический анализ проводится до инструментальных методов исследования при соответствующей симптоматике и позволяет предположить инфицированность Helicobacter pylori. По результатам анализа в случае необходимости назначаются другие методы исследования.

Преимущества и недостатки ПЦР-анализа кала

Специфическая терапия хеликобактериоза антибактериальными препаратами – процесс длительный, сопровождающийся плохой переносимостью у многих больных и высоким риском развития осложнений.

Назначение антибиотиков всем лицам, инфицированным Helicobacter pylori, — порочная практика. Специфическая антибиотикотерапия показана лишь пациентам с тенденцией к прогрессированию органических поражений – эрозий, язв, атрофического процесса, — как правило, заражённым определёнными штаммами хеликобактера. Этим больным требуется антибиотикотерапия с целью достижения ремиссии при язвенной болезни и предупреждения риска развития злокачественных новообразований.

Выявить цитотоксичные типы Helicobacter pylori можно только посредством ПЦР-метода.

Преимущества ПЦР-анализа кала:

  • высокая чувствительность метода;
  • высокая специфичность теста;
  • простота и неинвазивность забора материала;
  • безопасность;
  • возможность выделения как спиралевидных, так и кокковых форм Helicobacter pylori;
  • возможность выделения различных штаммов бактерии.

Чувствительность теста – способность к выдаче истинно положительных результатов. Чем выше чувствительность, тем ниже доля ложноположительных результатов, когда антиген якобы выявляется у неинфицированных лиц.

Специфичность теста – показатель, зависящий от количества ложноотрицательных (когда у инфицированного больного антиген не выделяется) результатов исследования. ПЦР-метод исследования кала на Helicobacter pylori характеризуется чувствительностью 64–94% и стопроцентной специфичностью.

Собрать кал легко и просто. В отличие от забора крови или гастродуоденоскопии взятие материала не требует применения местных анестетиков, на которые может развиться аллергическая реакция, не причиняет боли и дискомфорта, безопасно в плане заражения «грязным» инструментом. Исследование не требует приложения определённых усилий, как, например, дыхательный метод, что делает его доступным даже для маленьких детей.

Недостатки ПЦР-анализа кала:

  • отсутствие возможности определения чувствительности к антибактериальным препаратам;
  • отсутствие возможности различать текущую инфекцию и успешно излеченную, когда фрагменты ДНК бактерии могут оставаться в фекалиях около месяца;
  • более низкий показатель чувствительности по сравнению с исследованием биоптата (образца ткани или клеточной массы) слизистой желудка;
  • относительно высокая стоимость анализа с генотипированием;
  • строгие требования к персоналу: квалификация, неукоснительное соблюдение правил, аккуратность.

Один из основных недостатков ПЦР-метода является продолжением его основного достоинства: высокая чувствительность теста является причиной ложноположительных результатов в случае контаминации («загрязнения» извне) анализируемого материала.

Подготовка к сдаче анализа

Достоверность результата любого анализа зависит от чёткого выполнения определённых условий на всех этапах, и забор материала – не исключение.

Правила взятия материала:

  • за трое суток до анализа отменяются антибиотики, слабительные, замедляющие перистальтику препараты, ректальные свечи и некоторые другие лекарства по наставлению врача, поэтому следует предупредить доктора о применении тех или иных лекарственных препаратов;
  • сбор кала осуществляется в выданную лабораторией посуду, рекомендуется отбирать пробы из трёх разных точек;
  • биоматериал желательно доставить в лабораторию немедленно; в случае отсутствия такой возможности пробу следует хранить при температуре 2–8 градусов не дольше 24 часов;
  • если анализ выполняется для оценки эффективности назначенной ранее антибиотикотерапии против Helicobacter pylori, кал собирается не ранее, чем через четыре недели после окончания лечения.

Замедление пассажа каловых масс, запоры могут приводить к разрушению хеликобактера в фекалиях, что является причиной ложноотрицательных результатов. Для повышения достоверности результата врач может назначить перед анализом лёгкое слабительное – лактулозу.

Как и где сдать анализ

Анализы назначает гастроэнтеролог, поэтому перед исследованием на Helicobacter pylori необходима его консультация.

Примерная стоимость исследования кала:

  • ПЦР-метод с генотипированием – 1200 рублей;
  • ПЦР без генотипирования – 600 рублей;
  • чувствительность к антибиотикам – 600 рублей;
  • иммунологические методы – 400–650 рублей (в зависимости от метода).

Для наиболее точной диагностики Helicobacter pylori необходимо выбирать медицинское учреждение, заслужившее хорошую репутацию.

Результаты исследования

Период обработки анализов, их достоверность зависят от метода определения антигена.

Сроки выполнения, достоверность и интерпретация результатов анализов кала на хеликобактериоз.

Сроки Достоверность Результаты
ПЦР от 5–6 часов (экспресс-метод) до 2 дней высокая

1) отрицательный – не выделено ни одного заявленного генотипа бактерии;

2) положительный – хелибактериоз (текущий или в анамнезе), выделено не менее одного из заявленных генотипов

Бактериологический анализ
на чувствительность к антибиотикам
7–10 дней высокая – на чувствительность;

низкая – на выявление антигена

1) количество бактерий 0 – хеликобактер не выделен;

2) количество >0 — хелибактериоз;

3) S – чувствительность к указанному антибиотику;

4) R – резистентность (устойчивость) к антибиотику;

5) I – умеренная чувствительность к антибиотику.

Иммунологические методы 1 день низкая 1) отрицательный — возбудитель не выявлен;
2) положительный — хеликобактериоз

Низкая достоверность иммунологического и культурального анализа объясняется малымсодержанием антигена в фекалиях: если ПЦР-анализ чувствителен и при наличии 10 клеток, то для достоверного результата других методов клеток должно быть хотя бы в 10 раз больше.

Исследование кала на хелибактериоз безопасно, нетравматично и может осуществляться разными методами, позволяющими обнаружить инфекцию, определить штаммы вируса и чувствительность патогена к антибиотикам.

По результатам анализов можно сформировать группу риска, у представителей которой высока вероятность развития язвы желудка и двенадцатипёрстной кишки, злокачественных опухолей желудка; оценить степень риска и минимизировать его своевременным антибактериальным лечением цитотоксичных штаммов хеликобактериоза.